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酵母浸出液提取方法的改進(jìn)
1998,32(2):39～40/張瑞婷等 中國(guó)獸藥雜志?39?
酵母浸出液提取方法的改進(jìn)
張瑞婷 張立春
中國(guó)獸藥監(jiān)察所 北京 100081
收稿日期:1997-09-18
酵母浸出液是支原體培養(yǎng)基中不可能少的成份
[1,3]
孔濾板過(guò)濾除菌或經(jīng)116℃ 20分鐘高壓滅菌后,置4℃保存?zhèn)溆�。用此方法共制�?批酵母浸出液,批號(hào)為9659、9698及96918。1.4 培養(yǎng)基制備 用1.3項(xiàng)方法制備的3批改良酵母浸出液,及用作對(duì)照的英國(guó)產(chǎn)Oxiod酵母干粉,按《規(guī)程》規(guī)定的方法分別各配制3批支原體培養(yǎng)基及3批改良Frey氏培養(yǎng)基,將培養(yǎng)基按1.8ml/支的裝量分裝帶膠塞的小管(1.0×10cm)中備用。1.5 培養(yǎng)基質(zhì)量測(cè)定 對(duì)1.4項(xiàng)下制備的改良酵母浸出液及英國(guó)產(chǎn)Oxiod酵母干粉分別制成的兩種培養(yǎng)基進(jìn)行測(cè)定。取分裝好的培養(yǎng)基,每組10支,將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的各種支原體(WVU-1853、GX11-T、S株、R株及BTS-7株)種子0.2ml分別接入每組第1管后,按10稀釋法稀釋至第10管(即10-10),置37℃溫箱培養(yǎng)至第7天,以培養(yǎng)物顏色出現(xiàn)明顯變化的最高稀釋管作為終點(diǎn),即一個(gè)變色單位[2]。為避免誤差,每個(gè)樣品要做3組,計(jì)算3組試驗(yàn)的平均值作為判http://m.msguai.com定結(jié)果。2 結(jié) 果
2.1 改良法制取的酵母浸出液呈淡黃清亮液體與傳統(tǒng)方法制備的浸出液相同。
2.2 用改良法制取的酵母浸出液配制支原體培養(yǎng)基及改良Frey氏培養(yǎng)基,培養(yǎng)支原體的檢測(cè)結(jié)果如表1。3 討論與結(jié)論
用本改良法提取酵母浸出液,經(jīng)5株支原體標(biāo)準(zhǔn)菌株測(cè)定的數(shù)據(jù)表明均與英國(guó)Ox-oid酵母浸出干粉相一致,其質(zhì)量靈敏度也達(dá)到英國(guó)Oxoid酵母浸出干粉的標(biāo)準(zhǔn),從而[2]
×
[1]
,含有豐富核酸、核酸前體、維生
素、氨基酸及生長(zhǎng)因子,對(duì)于促進(jìn)支原體的生
長(zhǎng)繁殖及提高支原體在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)率起到重要作用。質(zhì)量合格的酵母浸出液是淡黃色或桔黃色的澄清液體。
長(zhǎng)期以來(lái),由于酵母浸出液的制備方法煩瑣[1],加之在制備過(guò)程中某些環(huán)節(jié)掌握不當(dāng)致使?fàn)I養(yǎng)成份受到破壞。其次是制備中處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(超過(guò)72小時(shí)),使污染雜菌的概率增加,制備過(guò)程中染菌的酵母浸出液其成品顏色發(fā)暗、質(zhì)量降低。受此類因素影響制備出的酵母浸出液各批次間差異很大,質(zhì)量極不穩(wěn)定,從而影響了各項(xiàng)支原體工作的正常進(jìn)行。
鑒于上述問(wèn)題,我們反復(fù)試驗(yàn)找到一種簡(jiǎn)便易行提取酵母浸出液的方法,改進(jìn)其傳統(tǒng)的制備方法,提高了支原體培養(yǎng)效率。經(jīng)過(guò)改進(jìn)后的提取方法主要是通過(guò)減少制備過(guò)程中的一些中間環(huán)節(jié),將傳統(tǒng)制作全過(guò)程需72小時(shí)縮短為8小時(shí),避免了長(zhǎng)時(shí)間處理造成污染機(jī)會(huì)增大的可能性。1 材料與方法
1.1 酵母 鮮酵母,北京第二食品廠出品;Oxoid酵母浸出干粉(英國(guó)產(chǎn))。
1.2 菌種 雞滑液支原體WVU-1853,GX11-T;雞毒支原體S株、R株;豬鼻支原體BTS-7均為本實(shí)驗(yàn)室保存。
1.3 酵母浸出液的制備 取500克鮮酵母,加1500ml雙蒸水,攪拌均勻,充分溶解后煮沸15分鐘,快速冷卻,4000r/min離心15分鐘,提取上清液,再煮沸15分鐘,快速冷卻,用,
?40?
中國(guó)獸藥雜志 1998,32(2):40～41/吳 金等
份沒(méi)有受到破壞,能滿足支原體生長(zhǎng)繁殖的需要。
表1 培養(yǎng)基質(zhì)量測(cè)定結(jié)果
檢測(cè)菌株WUV-1853GX11-7S株R株BTS-7
改良Frey
酵母浸出液批號(hào)及酵母干粉(英國(guó)產(chǎn))
培養(yǎng)基
969510-10-10101010
冰箱保存,用時(shí)116℃滅菌20分鐘。該提取方法操作復(fù)雜,制備時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。改進(jìn)后的方法操作簡(jiǎn)單,節(jié)省時(shí)間,避免了各批次間存在的質(zhì)量差異,同時(shí)避免了因質(zhì)量不合格造成原材料的浪費(fèi)。
酵母浸出液提取方法的研制成功,為各單位支原體研究、檢測(cè)工作的開(kāi)展,提供了簡(jiǎn)便的制備培養(yǎng)基的條件。參考文獻(xiàn)
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干粉10-10-10-10-10-10101010
969810-10-10-10-10-101099
干粉96918干粉10-10-10-10-10-1010109
10-10-10-10-10-
991010
10-10-10-10-10-
1091010
培養(yǎng)基10-10-支原體
10-培養(yǎng)基
99991010
1 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.中華人民共和國(guó)獸用生物制
品規(guī)程.一九九二年版
2 陳天壽主編.微生物培養(yǎng)基的制造與應(yīng)用.北京∶中
國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,1995,474
3 RCoteMA.ATCCMediaUnit.ATCCMediahand-book.Firstedition,1984,24
酵母浸出液傳統(tǒng)的制備過(guò)程要加氯仿,置55℃恒溫中自溶,每天搖動(dòng)2次,3天后取出,經(jīng)離心棄沉淀,其上清用布氏濾器濾過(guò),用氫氧化鈉調(diào)整pH至7.8,濾過(guò),靜置4℃
淺談生物制品的污染
吳 金 武潤(rùn)杰
黑龍江省生物制品一廠 哈爾濱 150069
收稿日期:1997-04-16
污染是生物制品的大敵,每年因污染而廢棄生物制品的要占一定的比例,造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。同時(shí)污染也影響著生物制品的質(zhì)量,然而污染又是可以控制的。
經(jīng)過(guò)多年生物制品工作的實(shí)踐,我們認(rèn)為污染的來(lái)源主要有以下幾方面:1 生產(chǎn)環(huán)境所引起的污染
在生產(chǎn)環(huán)境中,避塵室是生物制品生產(chǎn)過(guò)程中所必備的設(shè)置。首先,避塵室的建造應(yīng)該合理,便于清潔和消毒,以達(dá)到無(wú)塵和基本無(wú)菌的目的。避塵室封閉要嚴(yán)密,緩沖間的門(mén)和避塵室的門(mén)不能對(duì)開(kāi),以避免外界有菌空氣直接流入。同時(shí)緩沖間的門(mén)和避塵室的門(mén)均應(yīng)采用拉門(mén),以免開(kāi)關(guān)時(shí)空氣振動(dòng)造成污傳遞器材等物品。
目前,潔凈室在國(guó)內(nèi)已廣泛建立。有的生物制品廠已根據(jù)GMP標(biāo)準(zhǔn)建造了菌(疫)苗樓;有的廠家在原有避塵室的基礎(chǔ)上,經(jīng)過(guò)改造也建造了潔凈室。潔凈室的凈化程度可達(dá)到萬(wàn)級(jí),有的局部可達(dá)到百級(jí)�？墒遣糠謴S家由于種種原因仍然使用老式普通避塵室進(jìn)行菌(疫)苗的生產(chǎn)。這樣的避塵室在使用前必須進(jìn)行除菌消毒。常用的方法是先清掃干凈,以消毒藥液0.1%的新潔爾滅溶液或2.5～3%的石碳酸溶液擦頂棚、四壁、工作臺(tái)、凳和地面,然后再進(jìn)行薰蒸消毒。連續(xù)生產(chǎn),一般每周薰蒸一次。可采用丙二醇或甲醛薰蒸,薰蒸后再用氨水中和。細(xì)胞培養(yǎng)室為避免化學(xué),
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