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蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)
蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)
毛紅麗
（襄陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院．湖北寰陽(yáng)４４１０５０）
【摘要】探討了蝴垛蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)和方法。實(shí)驗(yàn)證明：用幼葉在散射光下培養(yǎng)誘導(dǎo)蝴蝶蘭原球莖的效果最好，最適培養(yǎng)基為：ＭＳ＋６一ＢＡｌｏｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡｌｍｇ／Ｌ水解乳蛋白５００ｍｇ／Ｌ＋蔗培養(yǎng)基為：ＭＡ＋６一ＢＡ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡｌｍｇ／Ｌ＋
３０９／Ｌ＋瓊脂７９／Ｌ（ｐＨ值５．４）；曩適增殖
解乳蛋白５００ｍｇ／Ｌ＋蔗．糖３０９／Ｌ＋瓊．．脂７９／Ｌ（ｐＨ值５．４）；曩適生根長(zhǎng)苗培
７９／Ｌ（ｐＨ值５．４）。
養(yǎng)基：１／２ＭＳ＋ＩＢＡｌ．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０５ｍｇ／Ｌ＋Ｏ．３％／ｇ＂性炭＋蔗糖３０９／Ｌ＋瓊．
［關(guān)鍵詞】蝴蝶蘭；原球莖；組織培養(yǎng)
蝴蝶蘭是單莖性氣生蘭．植株極少發(fā)育側(cè)芽，且種子極難萌發(fā)，對(duì)其進(jìn)行常規(guī)性的繁殖，增殖速度很m.msguai.com慢。影響了它的推廣和應(yīng)用。筆者通過對(duì)蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)的研究。旨在提高
蝴蝶蘭的繁殖系數(shù)。
２個(gè)月后統(tǒng)計(jì)原球莖的增殖倍數(shù)和原球莖的大小。
以上培養(yǎng)基中另添加５００ｍｅ／Ｌ的水解乳蛋白。７９／Ｌ瓊脂和３０ｄＬ蔗糖，ｐＨ值５．４。培養(yǎng)條件均為２５℃，光照時(shí)間１６ｈ。光照
強(qiáng)度２０００１）【。１．３壯苗與生根
１材料與方法
將增殖培養(yǎng)所得到的蝴蝶蘭小苗轉(zhuǎn)接到各種生根培養(yǎng)基（見表４），每處理１０瓶，每瓶３株，重復(fù)３次。培養(yǎng)３０ｄ后統(tǒng)計(jì)
１．１實(shí)驗(yàn)材料苗的生長(zhǎng)情況和生根率、平均生根率。
生根培養(yǎng)基中加入０．３％的活性碳＋蔗糖３０９／Ｌ＋瓊脂７９ｎ．。
培養(yǎng)條件均為２５℃，光照時(shí)間１６ｈ．光照強(qiáng)度２０００ｈ。
從陜西省西安市鼎天農(nóng)業(yè)科技有限公司購(gòu)買的大紅品系的３４月齡蝴蝶蘭幼苗。
１．２實(shí)驗(yàn)方法
１．２．１外植體的消毒。從蝴蝶蘭植株上取下幼葉（分１４ｄ、３０ｄ）
２結(jié)果與分析
和氣生根尖，放在自來水下沖洗干凈。在超凈工作臺(tái)上，將葉和根尖放入無菌瓶。用７５％酒精消毒３０ｓ。然后用無菌水清洗２．３遍．再用０．１％升汞溶液浸泡ｌＯｍｉｎ（分鐘），用無菌水沖洗４—５
遍后待用。
１．２．２原球莖的誘導(dǎo)。將幼葉切成５ｘ５ｍｍ見方的小塊和１０ｒａｍ長(zhǎng)根尖，平放或按極性接種以ＭＳ為基本培養(yǎng)基。添加激索
２．１
不同的外檀體誘導(dǎo)原球莖的差異
對(duì)蝴蝶蘭根尖、生長(zhǎng)齡為１４ｄ的幼葉和生長(zhǎng)齡為３０ｄ的葉
進(jìn)行原球莖的誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明（表１）：幼葉的誘導(dǎo)率最高為４７％。它的褐變率最低。只有６％。成熟葉的誘導(dǎo)率很低且褐化嚴(yán)
重到４７％。而根尖沒有誘導(dǎo)出原球莖�？梢娚L(zhǎng)齡為１４，ｔ幼葉
ＮＡＡＩｍｇ／Ｌ和不同的濃度ＢＡ（２ｍＵＬ、４ｍｇ／Ｌ、６ｍｇ／Ｌ、８ｍｓ／Ｌ、１０ｍｇ／Ｌ）配比的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，并設(shè)置散射光和２０００ｈ兩種作
比較，每瓶接種一個(gè)．每處理１０瓶．重復(fù)３次。培養(yǎng)２個(gè)月后觀
最有利于原球莖的產(chǎn)生。還發(fā)現(xiàn)在同一葉片上．葉基部的切塊
較葉中和葉尖的切塊誘導(dǎo)率高。對(duì)于比較小的幼葉，未切割時(shí)
也能誘導(dǎo)出原球莖。
２．２不同濃度的ＢＡ對(duì)原球莖誘導(dǎo)的影響
選用生長(zhǎng)齡為１４ｄ．大小為ｌｅｍ左右、葉色墩綠的葉片為誘導(dǎo)材科。滅菌后接種到含不同濃度的ＢＡ培養(yǎng)基上培養(yǎng)。堵養(yǎng)１５—２０ｄ發(fā)現(xiàn)葉片被切割周圍產(chǎn)生淺綠色的原球莖狀小突起．很次．能有效地控制菌核病的漫延。老黃葉也是菌核病和霜霉病等病害傳播源．容易將病害傳剄其他葉片，尤其受凍葉霜霉病重。摘除老黃葉則可防治或減輕菌核病等病害的發(fā)生。促進(jìn)植株的生長(zhǎng)發(fā)育。另外。油菜生長(zhǎng)中后期要加強(qiáng)對(duì)蚜蟲的防治，減
輕病蟲害損失。
察統(tǒng)計(jì)不同外植體在不同培養(yǎng)基中原球莖的誘導(dǎo)率及生長(zhǎng)情況。１．２．３原球莖的增殖。將誘導(dǎo)的原球莖按３—５個(gè)為一團(tuán)接種剄以ＭＳ為基本培養(yǎng)基添加激素ＮＡＡｌｍｓａ．．和不同的濃度ＢＡ（０、２ｍｇＩＬ、４ｍｇ／Ｌ、６ｍａＬ、８ｍｇ／Ｌ、１０ｍｅ／Ｌ）配比的增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)苗肥多、長(zhǎng)勢(shì)好的田塊一般不提倡在開春后施追肥．以免造成
貪青倒伏。
２．３加強(qiáng)病蟲害管理
菌核病是油菜的主要病害，開花期和角果發(fā)育期最易發(fā)生，一般年份可減產(chǎn)ｌ一３成．嚴(yán)重的可以造成大幅度減產(chǎn)甚至絕收．因此防治苗核病是實(shí)現(xiàn)油菜豐收的重要環(huán)節(jié)。首先要抓
好清溝排潰．捧除田間漬水．降低田問濕度．從而茂小病菌繁殖。其次是及時(shí)藥劑躊治．可選用５０％多菌靈可濕性粉卉畸０．１。
作者簡(jiǎn)介：
張英杰（１％７一’，女．湖北璉州人，ｌ奚職生技術(shù)學(xué)院捌教授，主要從事種植專生麓學(xué)與科研工作。
０．２ｋｇ或４０％菌核凈Ｏ．１加．２ｋｇ免水５０ｋｓ。在油菜花期防治１－２
—２６一
萬方數(shù)據(jù)
墨絲塑！塑絲蘭笪絕堡墮鲞墊查
快發(fā)育成為原球莖。
由表２可知．不同濃度的ＢＡ對(duì)原球莖的誘導(dǎo)率和原球莖
的大小影響比較明品。隨著ＢＡ濃度由２ｍ班增加到１０ｍｇｌ，，原
囊＇
不同外粵體誘導(dǎo)原球莖的差異球莖的誘導(dǎo)率也由６＿３３％逐漸增大．當(dāng)ＢＡ為１０ｍｇ／Ｌ時(shí)．誘導(dǎo)率最高達(dá)４１．６７％．說明高濃度ＢＡ促進(jìn)原球莖的誘導(dǎo)。
但原球莖直徑是隨ＢＡ濃度的增大。由小到大．再由大到小。ＢＡ６ｍｇ／Ｌ時(shí)原球莖的直徑最大為３．Ｓｍｍ。ＢＡｌｏｍｇ／Ｌ時(shí)原球莖的直徑最小為０．９ｍｍ。不足１ｍｍ。在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)當(dāng)原球莖不足Ｉｍｍ時(shí)。很難進(jìn)一步增殖生長(zhǎng)；誘導(dǎo)出的原球莖越大．越有利增殖生長(zhǎng)。所以在原球莖的誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中。選擇ＢＡ的最佳濃度為６ｍｇ／Ｌ。
２．３不同光照條件對(duì)原球莖誘導(dǎo)的影響
在對(duì)原球莖進(jìn)行誘導(dǎo)的過程中。發(fā)現(xiàn)外植體很容易褐化。抑制葉片揭化的方法是勤換培養(yǎng)基（１０ｄ換１次）．及時(shí)將葉片移入新鮮的培養(yǎng)基．可減輕褐化狀況。培養(yǎng)時(shí)還發(fā)現(xiàn)，褐化的程度與培養(yǎng)時(shí)的光照強(qiáng)度有關(guān)，當(dāng)光照強(qiáng)度為２０００Ｉｘ時(shí)．葉片褐
化的程度較嚴(yán)重．
達(dá)４０％左右：當(dāng)光照強(qiáng)度為其他培養(yǎng)架反射過來的弱散射光時(shí)．褐化得到了較好的抑制．僅為ｌＯ％左右。
２．４不同濃度ＢＡ對(duì)原球莖增殖與誘導(dǎo)出苗的影響
將誘導(dǎo)出來的原球莖轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)。表３可知．不同濃度的ＢＡ對(duì)原球莖的增殖和原球莖的大小影響比較明顯。隨著ＢＡ濃度的增加，原球莖增殖倍數(shù)逐漸增加但原球莖的大小呈先升后下降趨勢(shì)。當(dāng)ＢＡ為１０ｍ＃Ｌ時(shí)。原球莖的增殖倍數(shù)雖達(dá)到最高７．１２。但原球莖的大小最小為０．９。在原球莖增殖的同時(shí)。產(chǎn)生大量的叢生芽．但叢生芽長(zhǎng)得較為弱��；如果降低ＢＡ的濃度．當(dāng)其為２ｍｇ／Ｌ原球莖的增殖系數(shù)減少。但形成的多而粗壯。所以ＢＡ的最佳濃度為２ｍｇ／Ｌ。
２．５原球莖的生根
壯苗
將增殖得到的小
苗轉(zhuǎn)入到生根壯苗．培養(yǎng)基中。由表４可知。
當(dāng)基本培養(yǎng)基為１，
２ＭＳ．ＮＡＡ為００５ｍｇＬ．ＩＢＡ為１．ＳｍｇＬ時(shí)。苗的生根率達(dá)到最高
５００％．且苗的生長(zhǎng)勢(shì)最健壯。
萬方數(shù)據(jù)
宣登量茭墮
３討論
３．１
影響原球莖誘導(dǎo)的因素
在蝴蝶蘭的同體培養(yǎng)中．進(jìn)行原球莖誘導(dǎo)的外植體選擇
時(shí)．明顯地發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)肥厚的幼嫩葉片的誘導(dǎo)率最為理想。這與楊美純等的研究一致。在實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)．葉基部的切塊較葉中和葉尖的切塊的誘導(dǎo)率高。在對(duì)葉片切割時(shí)，過多的切口會(huì)使葉片褐化死亡。所以在對(duì)幼葉切割時(shí)，將葉片從葉基部切下。可以獲得最高的誘導(dǎo)率。
在原球莖的誘導(dǎo)過程中。ＢＡ的濃度對(duì)原球莖的誘導(dǎo)效率和生長(zhǎng)勢(shì)有很大的影響。在ＢＡ為０一ｌＯｍｇ／Ｌ的范圍內(nèi)．隨著ＢＡ濃度的升高原球莖的誘導(dǎo)率也在增加，但原球莖的生長(zhǎng)勢(shì)卻不好。近年來。一些研究只報(bào)道了ＢＡ濃度對(duì)原球莖誘導(dǎo)率的影響。卻沒研究對(duì)誘導(dǎo)出的原球莖的生長(zhǎng)勢(shì)的影響。筆者結(jié)合兩方面的比較．確定最終的ＢＡ的濃度為６ｍｇ／Ｌ．這樣誘導(dǎo)率比較高。且原球莖的生長(zhǎng)狀況良好。為原球莖的進(jìn)一步增殖打下基礎(chǔ)。光照條件也是影響原球莖誘導(dǎo)的一個(gè)重要因素。散射光有利于原球莖的誘導(dǎo)。并能有效地減輕葉片誘導(dǎo)時(shí)的褐化狀況。３．２影響原球莖增殪的因素
在對(duì)蝴蝶蘭原球莖的增殖實(shí)驗(yàn)中研究發(fā)現(xiàn)。隨著ＢＡ濃度的增加。原球莖的增殖率提高。并且在不加ＢＡ的條件下。原球莖也能增殖．這可能是原球莖自己體內(nèi)已積累了較高水平的細(xì)胞分裂素的緣故。這與周俊輝、王芳的報(bào)道一致，但與王亦菲、彭立新的結(jié)果不同。另外。從控制遺傳變異方面考慮．不應(yīng)使用高濃度的激素組合．以免原球莖多代增殖后形成異常苗。在實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)．原球莖在切割時(shí)。不應(yīng)切的太�。駝t褐化情況嚴(yán)重。在接種時(shí)．原球莖應(yīng)緊密的靠在一起．這樣才能生長(zhǎng)旺盛。從實(shí)驗(yàn)中可以得出原球莖在增殖生長(zhǎng)時(shí)。具有較強(qiáng)的群體優(yōu)勢(shì)效應(yīng)．與彭立心、馬子駿和周俊輝的報(bào)道一致。３．３影響蝴蝶蘭生根壯苗的因素
在蝴蝶蘭生根壯苗培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)．１，２ＭＳ比ＭＳ的效果好。ＮＡＡ濃度對(duì)出苗率沒有多大影響。活性碳的添加．可以有效防止原球莖褐化．有利于小茁的生長(zhǎng)。參考文獻(xiàn)
［１】楊是鮑、用歧偉、許塢源．等．外部因子對(duì)蝴蝶蘭葉片原球莖狀體
發(fā)生的影響ＬＪ】．廣西植物．２０００．２０（１）：４２—４６．
［２】
彭立新、王蛛、孟廣云，等．蝴蝶蘭蛆織培養(yǎng)快繁研究Ｕ】．天津農(nóng)業(yè)
科學(xué)．１９９９，５（２）：２７－２９．
［３】葉曉青、謝東、魏書．等．不同激素水平時(shí)蝴壕蘭原球堇狀體增殖
的影響ＬＪ］．江蘇林業(yè)科技．２０００．２７（增刊）：４２—４４．
［４】
王芳、文峰、武破．等．激素對(duì)蝴壤蘭快速繁殖的影響Ｕ】．新疆農(nóng)業(yè)
大學(xué)學(xué)報(bào)．２００３．２６．（４）：６８－７１．
【５】
用俊輝、葉趕紅、陳旭南．等．蝴壕蘭原球堇增殖培養(yǎng)的研究【Ｊ］．仲
凱農(nóng)業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)．２００２．１５（３）：１３－１７．
作者簡(jiǎn)介：
毛紅膏（１９６１一）．女．ｔ英職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)虎工作。
－２７—
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