重組豬源戊型肝炎病毒衣殼蛋白的原核表達(dá)及鑒定

目的 原核表達(dá)豬源戊型肝炎病毒衣殼蛋白,并對其反應(yīng)原性進(jìn)行分析.方法 通過FCR從已構(gòu)建的豬源戊型肝炎病毒全基因克隆擴增ORF2編碼382～674位氨基酸序列的基因片段,將擴增產(chǎn)物插入到pMD18-T載體中,亞克隆至原核表達(dá)載體pET28a(+),構(gòu)建pET28a-293表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá).表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Ni-NTA層析柱純化后,進(jìn)行SDS-PAGE、Western blot及ELISA鑒定.結(jié)果 成功擴增到904 bp的目的 基因.重組載體pET28a-293經(jīng)雙酶切鑒定及序列測定,證實構(gòu)建正確.SDS-PAGE分析表明表達(dá)產(chǎn)物的相對分子質(zhì)量與預(yù)期相符,表達(dá)量可占菌體總蛋白的66.15%.Western blot分析表明目的 蛋白具有較好的反應(yīng)原性.ELISA試驗證實目的 蛋白能與陽性豬源和標(biāo)準(zhǔn)HEV血清發(fā)生反應(yīng).結(jié)論 已成功構(gòu)建了豬源戊型肝炎病毒衣殼蛋白的pET28a-293原核表達(dá)載體,并得到了有效表達(dá),為進(jìn)一步建立豬源戊型肝炎的診斷方法奠定基礎(chǔ).

作 者： 屈勇剛 朱光澤 金寧一 孫中鋒 于芳 劉玉生 胡寧寧 陸民 夏志平   作者單位： 屈勇剛(吉林大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院,長春,130062;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院十一所病毒室,長春,130062;石河子大學(xué)動物科技學(xué)院,石河子,832003)

朱光澤(長春中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床附屬醫(yī)院,長春,130021)

金寧一,孫中鋒,于芳,劉玉生,胡寧寧,夏志平(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院十一所病毒室,長春,130062)

陸民(吉林大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院,長春,130062) 

刊 名： 中國生物制品學(xué)雜志  ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS  年，卷(期)： 2008 21(3)  分類號： Q786 R373.2  關(guān)鍵詞： 豬源戊型肝炎病毒   衣殼蛋白   原核表達(dá)   反應(yīng)原性  

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