大鼠CD40基因RNA干擾真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定

目的:構(gòu)建靶向大鼠CD40基因小分子干擾RNA(siRNA)真核細(xì)胞表達(dá)載體.方法:利用Ambion公司的網(wǎng)上設(shè)計(jì)工具,設(shè)計(jì)2個(gè)靶向CD40基因的發(fā)夾狀siRNA,通過(guò)化學(xué)合成的方法合成2對(duì)分別互補(bǔ)的寡核苷酸鏈,退火后將雙鏈DNA片段連接至pSilencer4.1-CMV neo vector的多克隆位點(diǎn),轉(zhuǎn)化擴(kuò)增提取質(zhì)粒,對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行BamHⅠ和Hind Ⅲ雙酶切電泳鑒定和DNA序列分析鑒定.結(jié)果:經(jīng)酶切電泳鑒定和DNA序列分析鑒定,目的片段與pSilencer4.1-CMV neo vector連接正確,靶向大鼠CD40基因的siRNA重組表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建成功.結(jié)論:成功構(gòu)建了大鼠CD40基因的RNA干擾真核表達(dá)載體pSilencer4.1-CMV-CD40.1和pSilencer4.1-CMV-CD40.2,為進(jìn)一步研究CD40基因在同種器官移植排斥反應(yīng)中的作用奠定基礎(chǔ).

作 者： 王楠 馬慶久 魯建國(guó) 何顯力 鄒愛(ài)民 李坤 WANG Nan MA Qing-jiu LU Jian-guo HE Xian-li ZOU Ai-min LI Kun   作者單位： 王楠,馬慶久,魯建國(guó),何顯力,WANG Nan,MA Qing-jiu,LU Jian-guo,HE Xian-li(第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院普通外科,陜西西安,710038)

鄒愛(ài)民,李坤,ZOU Ai-min,LI Kun(第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室,陜西西安,710038) 

刊 名： 醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATES  年，卷(期)： 2008 21(3)  分類號(hào)： Q782  關(guān)鍵詞： RNA干擾   CD40   重組載體  

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