RNA干擾技術(shù)用于survivin基因表達(dá)的研究

目的:構(gòu)建pSUPER-SVV表達(dá)載體,并在真核細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá),驗證survivin基因表達(dá)是否受到抑制.方法:設(shè)計特異性以survivin基因為靶序列的寡核苷酸序列,退火后將其連接于pSUPER.basic載體中,經(jīng)測序鑒定插入序列的正確性.以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將pSUPER-SVV干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人類宮頸癌(HeLa)細(xì)胞,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)和RT-PCR方法檢測survivin基因的表達(dá)情況.結(jié)果:成功構(gòu)建survivin的RNAi表達(dá)載體.該載體可以使HeLa細(xì)胞中survivin基因在mRNA轉(zhuǎn)錄水平明顯降低,與轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組相比差異具有顯著性(P＜0.05).利用流式細(xì)胞術(shù)檢測蛋白表達(dá)水平,轉(zhuǎn)染pSUPER-SVV組抑制率可達(dá)31.62%,與轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組相比差異具有顯著性(P＜0.001).結(jié)論:成功構(gòu)建干擾survivin基因表達(dá)的載體,轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞后survivin基因在mRNA轉(zhuǎn)錄水平、蛋白表達(dá)水平均受到明顯抑制.

作 者： 沈波 鞠桂芝 劉揚 SHEN Bo JU Gui-zhi LIU Yang   作者單位： 吉林大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院放射生物學(xué)教研室,吉林,長春,130021  刊 名： 吉林大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION)  年，卷(期)： 2006 32(3)  分類號： Q3  關(guān)鍵詞： survivin   RNA干擾   基因表達(dá)  

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