質(zhì)粒介導(dǎo)shRNA對(duì)心肌細(xì)胞kir2.1蛋白表達(dá)和搏動(dòng)頻率的影響

目的構(gòu)建抑制大鼠心肌細(xì)胞kir2.1基因的短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表達(dá)質(zhì)粒(pEGFP6-1kir2.1),觀察RNAi對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞kir2.1 mRNA和蛋白表達(dá)情況和搏動(dòng)頻率的影響.方法選擇5個(gè)針對(duì)大鼠心肌細(xì)胞kir2.1基因的RNA干擾位點(diǎn),分別設(shè)計(jì)合成5對(duì)相應(yīng)的寡核苷酸鏈,形成雙鏈后依次將其連入帶有U6啟動(dòng)子的載體,得到含5個(gè)目的基因的重組質(zhì)粒pEGFP6-1kir2.1,轉(zhuǎn)染大鼠心肌細(xì)胞,轉(zhuǎn)染后72 h RT-PCR和Western-blot檢測(cè)kir2.1 mRNA和蛋白表達(dá)情況,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的搏動(dòng)情況.結(jié)果轉(zhuǎn)染后72 h,實(shí)驗(yàn)組心肌細(xì)胞kir2.1mRNA和蛋白表達(dá)明顯低于兩對(duì)照組(P＜0.01),兩對(duì)照組無(wú)明顯差異.轉(zhuǎn)染后72 h,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞搏動(dòng)簇搏動(dòng)頻率較轉(zhuǎn)染后48 h進(jìn)一步增快,兩對(duì)照組無(wú)明顯變化.結(jié)論真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP6-1kir2.1能明顯抑制大鼠心肌細(xì)胞kir2.1基因的表達(dá),提高大鼠心肌細(xì)胞的自律性.

作 者： 李凡東 鄒承偉 雷印勝 范全心   作者單位： 山東大學(xué)山東省立醫(yī)院心外科,山東,濟(jì)南,250021  刊 名： 中國(guó)老年學(xué)雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY  年，卷(期)： 2006 26(2)  分類號(hào)： Q786  關(guān)鍵詞： RNA干擾   kir2.1   質(zhì)粒   生物起搏器  

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