通過(guò)N端替換提高木聚糖酶的熱穩(wěn)定性

以來(lái)源于Thermomonospora fusca的耐高溫木聚糖酶TfxA和來(lái)源于Streptomyces olivaceoviridis的高比活木聚糖酶XYNB為親本,構(gòu)建出耐熱高比活融合木聚糖酶TB,將TB在大腸桿菌BL21和畢赤酵母GS115中進(jìn)行表達(dá)并對(duì)表達(dá)產(chǎn)物的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分析比較.分析表明,融合蛋白TB最適pH值為6.0,最適溫度為70℃,較XYNB有大幅度的提高;在熱穩(wěn)定性方面,TB明顯優(yōu)于XYNB,將兩種稀釋好的酶液分別在80℃和90℃下熱處理3min,TB的熱穩(wěn)定性較XYNB提高了6倍左右;TB的pH穩(wěn)定性為5～9(相對(duì)剩余活性在50%以上的pH范圍),較XYNB有所下降,但兩者的比活性基本不變,保持了親本XYNB的高比活性.通過(guò)同源建模和序列比較,分析了可能影響融合蛋白TB酶學(xué)性質(zhì)的因素,為進(jìn)一步研究木聚糖酶的結(jié)構(gòu)與功能提供了新的思路.

作 者： 楊浩萌 孟昆 羅會(huì)穎 王亞茹 袁鐵錚 柏映國(guó) 姚斌 范云六 YANG Hao-Meng Meng Kun LUO Hui-Ying WANG Ya-Ru YUAN Tie-Zheng BAI Ying-Guo YAO Bin FAN Yun-Liu   作者單位： 楊浩萌,孟昆,羅會(huì)穎,王亞茹,袁鐵錚,柏映國(guó),姚斌,YANG Hao-Meng,Meng Kun,LUO Hui-Ying,WANG Ya-Ru,YUAN Tie-Zheng,BAI Ying-Guo,YAO Bin(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所,北京,100081)

范云六,FAN Yun-Liu(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所,北京,100081) 

刊 名： 生物工程學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(1)  分類(lèi)號(hào)： Q55  關(guān)鍵詞： 融合木聚糖酶   木聚糖酶氮端   熱穩(wěn)定性  

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