噬菌體展示技術(shù)篩選DNA錯(cuò)配修復(fù)蛋白MutS高親和性抗體

目的制備MutS的高親和抗體,以有利于MutS的檢測(cè)及應(yīng)用.方法利用IPTG的誘導(dǎo)作用,在E.coli中誘導(dǎo)表達(dá)目標(biāo)蛋白MutS.利用親和層析方法獲得目標(biāo)蛋白,并利用凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)分析其活性.將MutS作為抗原,在Tomlinson抗體庫(kù)中利用噬菌體展示技術(shù)來(lái)篩選MutS的高親和力噬菌粒.將其轉(zhuǎn)化到大腸桿菌后,誘導(dǎo)表達(dá)并通過(guò)親和層析的方法來(lái)獲得可溶性的抗體片段,并檢測(cè)其親和力.結(jié)果純化后的MutS具有識(shí)別、結(jié)合錯(cuò)配DNA雙鏈的活性.ELISA分析表明,利用噬菌體展示技術(shù)可獲得MutS高親和力的噬菌粒.將其轉(zhuǎn)化到大腸桿菌HB2151后,誘導(dǎo)表達(dá)并純化到抗體片段,其親和力為0.9×108 L/mol.結(jié)論利用噬菌體展示技術(shù)篩選到MutS高親和力的抗體.

作 者： 劉俊 全智勇 劉建華 LIU Jun QUAN Zhi-yong LIU Jian-hua   作者單位： 上海交通大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,上海,200240  刊 名： 復(fù)旦學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）  ISTIC PKU 英文刊名： FUDAN UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCES  年，卷(期)： 2006 33(4)  分類號(hào)： Q81  關(guān)鍵詞： 噬菌體展示   DNA錯(cuò)配修復(fù)蛋白MutS   可溶性抗體片段  

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