HSF1基因敲除小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的永生化

目的:建立HSF1-/-,HSF1+/+兩種基因型小鼠胚胎成纖維永生化細(xì)胞系,為HSF1的功能研究提供實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?方法:用脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染法將pSV3neo質(zhì)粒導(dǎo)入HSF1-/-,HSF1+/+兩種基因型小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,經(jīng)G418篩選,抗性克隆擴(kuò)大培養(yǎng),建立永生化細(xì)胞系;用PCR檢測兩種細(xì)胞株中目的基因的整合,用RT-PCR法鑒定SV40 T基因在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的表達(dá);用Western blot檢測所建細(xì)胞株的誘導(dǎo)型熱休克蛋白70的表達(dá)情況.結(jié)果:有3個(gè)細(xì)胞克隆已擴(kuò)大培養(yǎng)穩(wěn)定傳代達(dá)6個(gè)月,經(jīng)鑒定SV40 T抗原已整合到兩種細(xì)胞中且穩(wěn)定表達(dá), HSF1-/-胚胎成纖維細(xì)胞熱休克蛋白70的誘導(dǎo)表達(dá)消失.結(jié)論:成功建立永生化HSF1-/-,HSF1+/+兩種基因型小鼠胚胎成纖維細(xì)胞.

作 者： 劉梅冬 張華莉 龔環(huán)宇 陳廣文 王慷慨 鄂順梅 肖獻(xiàn)忠 LIU Mei-dong ZHANG Hua-li GONG Huan-yu CHEN Guang-wen WANG Kang-kai E Shun-mei XIAO Xian-zhong   作者單位： 劉梅冬,張華莉,陳廣文,王慷慨,鄂順梅,肖獻(xiàn)忠,LIU Mei-dong,ZHANG Hua-li,CHEN Guang-wen,WANG Kang-kai,E Shun-mei,XIAO Xian-zhong(中南大學(xué),湘雅醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室,長沙,410078)

龔環(huán)宇,GONG Huan-yu(中南大學(xué),湘雅三醫(yī)院,長沙,410013) 

刊 名： 中南大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES)  年，卷(期)： 2006 31(2)  分類號： Q813.2  關(guān)鍵詞： HSF1   基因敲除   胚胎成纖維細(xì)胞   永生化   SV40T抗原  

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