PCR-雙酶切鑒定STGC3抑癌基因重組子假陽(yáng)性研究

目的:探討PCR與雙酶切技術(shù)聯(lián)合使用鑒定陽(yáng)性重組子的特異性和可靠性,評(píng)價(jià)長(zhǎng)期保存的重組質(zhì)粒再次測(cè)序的必要性.方法:對(duì)隨機(jī)選取已經(jīng)過(guò)測(cè)序驗(yàn)證的三組STGC3/pcDNA 3.1(+)、一組STGC3/pGEM Easy T Vector重組子首先經(jīng)過(guò)LB氨芐平皿培養(yǎng)挑單克隆篩選,然后單獨(dú)或聯(lián)合使用PCR和雙限制性?xún)?nèi)切酶BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切方法鑒定,將陽(yáng)性樣品送交生物工程公司測(cè)序,比較并評(píng)價(jià)兩者結(jié)果的一致性.結(jié)果:三組STGC3/pcDNA 3.1(+)重組子經(jīng)PCR-雙酶切檢測(cè)陽(yáng)性而不能通過(guò)測(cè)序,說(shuō)明該檢測(cè)方法在運(yùn)用中確實(shí)存在假陽(yáng)性,同時(shí)證明重組載體在長(zhǎng)期保存后有必要再次鑒定.結(jié)論:保存過(guò)程中的雜菌污染、實(shí)驗(yàn)室操作中的質(zhì)粒交叉污染以及重組載體基因突變是基因工程操作中不可忽視的問(wèn)題;PCR-雙酶切鑒定重組載體存在假陽(yáng)性的問(wèn)題,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中應(yīng)包含陽(yáng)性與陰性(污染)對(duì)照,并有足夠的重復(fù)實(shí)驗(yàn).

作 者： 蔣俊豪 賀修勝 JIANG Jun-hao HE Xiu-sheng   作者單位： 南華大學(xué)腫瘤研究所,湖南,衡陽(yáng),421001  刊 名： 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展  ISTIC 英文刊名： PROGRESS IN MODERN BIOMEDICINE  年，卷(期)： 2007 7(6)  分類(lèi)號(hào)： Q331  關(guān)鍵詞： PCR   雙酶切   STGC3 基因   假陽(yáng)性  

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