糞腸球菌中具有啟動(dòng)功能的DNA片段的捕獲及鑒定

PCR擴(kuò)增來(lái)自質(zhì)粒pUC119的β-內(nèi)酰胺酶基因(bla)作報(bào)告基因,克隆進(jìn)質(zhì)粒pNZ8037上的能被Nisin誘導(dǎo)的啟動(dòng)子PnisA下游,構(gòu)建了糞腸球菌啟動(dòng)功能片段探測(cè)載體pNZ-bla.利用該探測(cè)載體從糞腸球菌染色體總DNA中克隆到了能在糞腸球菌中表達(dá)的一系列具有啟動(dòng)功能的DNA片段,將包含克隆片段的pNZ-P-bla6質(zhì)粒電擊轉(zhuǎn)化糞腸球菌,培養(yǎng)轉(zhuǎn)化子并檢測(cè)其抗氨芐強(qiáng)度,結(jié)果表明其抗氨芐強(qiáng)度大于Nisin誘導(dǎo)的含pNZ-bla質(zhì)粒的糞腸球菌.表明克隆的功能片段啟動(dòng)能力強(qiáng)于PnisA.在pNZ-P-bla6的啟動(dòng)功能片段下游Sau3AⅠ和EcoRⅠ之間接上綠色熒光蛋白基因作為標(biāo)記,構(gòu)建表達(dá)綠色熒光蛋白的質(zhì)粒載體pNZ-P-gfp并導(dǎo)入糞腸球菌中,共聚焦顯微鏡下可以觀察到綠色熒光蛋白的表達(dá).

作 者： 黃路標(biāo) 張伯生 任大明 HUANG Lu-biao ZHANG Bo-sheng REN Da-ming   作者單位： 復(fù)旦大學(xué),生命科學(xué)學(xué)院,遺傳學(xué)研究所,遺傳工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海,200433  刊 名： 復(fù)旦學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF FUDAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)  年，卷(期)： 2006 45(3)  分類號(hào)： Q781  關(guān)鍵詞： 乳酸菌   糞腸球菌   啟動(dòng)子   克隆載體   GFP  

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