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南北五味子中五味子酯甲含量的測(cè)定論文
【摘要】 目的：建立南、北五味子中五味子酯甲的測(cè)定方法并比較其在南、北五味子中含量的差異。方法：采用超聲提取法提取南、北五味子中五味子酯甲，利用紫外可見分光光度法測(cè)定五味子酯甲的含量。結(jié)果：五味子酯甲在220nm處有最大吸收，其在0.15～0.65mg·mL-1(r=0.999 6)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;南五味子中五味子酯甲平均回收率為96.54%，RSD為1.67%(n=5);北五味子中五味子酯甲平均回收率為97.77%，RSD為2.87%(n=5)。結(jié)論：該方法用于測(cè)定五味子藥材中五味子酯甲的含量具有簡(jiǎn)單快捷，重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，可用于五味子藥材中五味子酯甲的質(zhì)量控制。
【關(guān)鍵詞】 南五味子;北五味子;五味子酯甲;分光光度法/紫外線
【ABSTRACT】 Objective：To investigate a method for determination of schisantherin A in Schisandra chinensis(Turcx.)Baill and Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils,and compare the difference in contents.Methods：The schisantherin A was extracted by ultrasonic extraction method,then uv瞯is spectrophotometry was applied.Results：Schisantherin A was absorbed maximally at 222 nm wavelength,and showed a good linear relationship at the range of 0.15～0.65mg·mL-1(r=0.999 6).The average recorery of schisantherin A in Sichasndra sphenanthera Rehd.et Wils was 96.54%，RSD was 1.67%(n=5).The average recorery of schisantherin A in Schisandra chinensis(Turcx. )Baill was 97.77%，RSD was 2.87%(n=5).Conclusion：The method is simple，rapid,reproducible，and suitable for the quality control of Schisandra chinensis Fruit.
【KEY WORDS】 Schisandra sphenantherac Rehd.et Wils,Schisandera chinensis(Turcx)Baill,Schisantherin A,Spectrophotometry/Ultraviolet
五味子系木蘭科植物五味子[Schisandera chinensis(Turcx.)Baill.]或華中五味子[Schisandra sphenantherac Rehd.et Wils]的干燥成熟果實(shí)，是常用的滋補(bǔ)型中藥，因其果肉甘、酸、辛、苦、咸五味俱全,故名五味子，傳統(tǒng)認(rèn)為北五味子的品質(zhì)要好于南五味子，《本草綱目》上有“五味，今有南北之分，南產(chǎn)者色紅,北產(chǎn)者色黑。入滋補(bǔ)藥，必用北產(chǎn)者良”的記載，所以臨床用藥多為北五味子，也稱遼五味子;華中五味子又稱為“南五味子”。2005年頒布的《中國(guó)藥典》將北五味子和南五味子分別收載為兩個(gè)品種。五味子是一種多用途、價(jià)值極高、藥食兼用型經(jīng)濟(jì)植物，其有效成分主要為木脂素類如：五味子甲素、五味子乙素、五味子酯甲、五味子醇甲等，揮發(fā)油類如：α蒎烯、β蒎烯、月桂烯、檸檬烯、金合歡烯和乙酸龍腦酯等[1]，藥理研究表明五味子具有斂肺、澀精、止汗、止瀉、生津、益智、安神之功效，主要用于治療肺虛咳嗽、盜汗、痢疾、神經(jīng)衰弱、急慢性肝炎、視力衰退等癥[2]，其中五味子酯甲對(duì)化學(xué)毒物引起的動(dòng)物肝細(xì)胞損傷有明顯保護(hù)作用，可抑制轉(zhuǎn)氨酶的釋放，使丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性降低[3]。但是南、北五味子植物學(xué)形態(tài)十分相似，市場(chǎng)使用非常混亂，以南五味子冒充北五味子的現(xiàn)象十分普遍。本實(shí)驗(yàn)利用超聲提取方法對(duì)南、北五味子藥材的有效成分之一五味子酯甲進(jìn)行提取，對(duì)其含量進(jìn)行分析測(cè)定，考察其在南、北五味子中的差異，為南、北五味子的鑒別及臨床合理應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和科學(xué)參考。
1 材料與方法
2010年2月譚曉虹等：南、北五味子中五味子酯甲含量的測(cè)定第1期2010年2月河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)第1期1.1 儀器與試劑
756MC型紫外部杉分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器廠)。
HS3120型超聲波儀(寧波江南儀器廠)。
TG328A型分析天平(上海天平儀器廠)。
GOA型電熱真空干燥箱(天津東郊機(jī)械加工廠)。
五味子酯甲對(duì)照品(上海融禾醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào)：071105)，南五味子和北五味子均購(gòu)于張家口市藥材公司，經(jīng)鑒定為遼寧產(chǎn)北五味子和四川產(chǎn)南五味子，甲醇為分析純(天津市化學(xué)試劑三廠)，實(shí)驗(yàn)用水為三重蒸餾水。
1.2 方法
1.2.1 對(duì)照品溶液的制備
精密稱取五味子酯甲對(duì)照品0.010 0g，用甲醇溶解并定容至10mL，搖勻，得1.0mg·mL-1的儲(chǔ)備液，即為五味子酯甲對(duì)照品溶液。
1.2.2 供試品溶液的制備
將同一批次的南五味子和北五味子用蒸餾水快速漂洗三次后，置70℃的干燥箱中干燥，然后研磨成粉末狀。用分析天平準(zhǔn)確稱取樣品粉末0.500 0g五份于25mL比色管中加入甲醇，采用超聲提取，并對(duì)文獻(xiàn)中的提取方法進(jìn)行了改進(jìn)，先浸泡放置30min后于45℃超聲提取30min，常壓過濾，在濾渣中加入甲醇25mL，再于45℃進(jìn)行超聲提取30min，常壓過濾，合并兩次濾液定容至50mL作為供試品溶液[4]。
1.2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇
將對(duì)照品儲(chǔ)備液稀釋成濃度為0.010 0 mg·mL-1溶液，在波長(zhǎng)0～600nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，確定五味子酯甲的的最大吸收波長(zhǎng)λmax=222nm。
1.2.4 線性關(guān)系的考察
將對(duì)照品貯備液用甲醇稀釋成下列濃度：0.150、0.250、0.350、0.450、0.550和0.650mg·mL-1，以甲醇做空白，于λmax=222nm波長(zhǎng)下分別測(cè)定上述標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度，以質(zhì)量濃度x(mg·mL-1)為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸計(jì)算，得到五味子酯甲的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及相關(guān)系數(shù)r。
1.2.5 精密度試驗(yàn)
取0.100mg·mL-1對(duì)照品溶液，于222nm波長(zhǎng)下重復(fù)測(cè)定5次，記錄吸光度值。
1.2.6 重復(fù)性試驗(yàn)
精密稱取同一批次南、北五味子藥材粉末各5份，按方法“1.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，并于222nm波長(zhǎng)下進(jìn)行分析測(cè)定。
1.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密稱取同一批次南、北五味子藥材粉末，按方法“1.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、10、14、24h測(cè)定，考察穩(wěn)定性。
1.2.8 回收率試驗(yàn)
取已知五味子酯甲準(zhǔn)確含量的南、北五味子樣品5份，分別精密加入一定量的五味子酯甲對(duì)照品，按方法“1.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，測(cè)定其吸光度并求得含量，計(jì)算回收率。
1.2.9 樣品的測(cè)定
取上述南、北五味子供試品溶液各5份，測(cè)定其吸光度值并用標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求出樣品中五味子酯甲的含量。
2 結(jié)果
2.1 線性關(guān)系的考察 以質(zhì)量濃度x(mg·mL-1)為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，得到五味子酯甲的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y=0.889 4x-0.008 3(r=0.999 6)，結(jié)果表明五味子酯甲濃度在0.15～0.65mg·mL-1范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。
2.2 精密度試驗(yàn)
重復(fù)測(cè)定5次對(duì)照品溶液所得吸光度值的RSD為0.540%,表明儀器精密度良好。
2.3 重復(fù)性試驗(yàn)
重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中，同一批次5份樣品測(cè)定，結(jié)果表明南五味子中五味子酯甲R(shí)SD為2.01%。北五味子中五味子酯甲R(shí)SD為2.50%，表明該方法重復(fù)性良好。
2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)
取供試品溶液,每隔一定時(shí)間測(cè)定一次，五味子酯表1 南五味子中五味子酯甲的回收率試驗(yàn)表2 北五味子中五味子酯甲的回收率試驗(yàn)表3 南、北五味子中五味子酯甲的含量(mg·mL-1)甲含量在24h內(nèi)基本保持不變，南五味子的RSD為3.59%，北五味子的RSD為3.91%(n=5)，表明供試品溶液中五味子酯甲在24h內(nèi)測(cè)定基本穩(wěn)定。
2.5 回收率試驗(yàn)
南五味子回收率試驗(yàn)結(jié)果見表1、北五味子回收率試驗(yàn)結(jié)果見表2。
2.6 樣品含量
實(shí)驗(yàn)中所測(cè)本批次南、北五味子中五味子酯甲含量結(jié)果見表3。
3 討論
3.1 超聲提取因其具有強(qiáng)烈振動(dòng)和空化效應(yīng)，可以加速有效成分的溶出，提取溫度要求較低，克服了傳統(tǒng)有機(jī)溶劑提取中有效成分因高溫質(zhì)變的可能，使得有效物質(zhì)活性不易被破壞，提取時(shí)間短，產(chǎn)率高，操作簡(jiǎn)單，已在天然產(chǎn)物提取方面得到了廣泛的應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)首先將樣品浸泡一定時(shí)間再利用超聲提取方法提取南、北五味子中五味子酯甲，此法較一般常用提取方法如萃取法、冷浸法、回流提取法等具有提取速度快，提取溶劑用量少且操作簡(jiǎn)便易行等優(yōu)點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)效果良好。
3.2 五味子酯甲結(jié)構(gòu)如下：
在其結(jié)構(gòu)中含有共軛體系，因此在紫外光區(qū)有特征吸收，所以利用紫外分光光度法進(jìn)行分析，此方法靈敏度和準(zhǔn)確度較高。本實(shí)驗(yàn)采用紫外分光光度法測(cè)定五味子酯甲的含量，得到了滿意的結(jié)果，建立了一種準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速的測(cè)定南、北五味子中五味子酯甲含量的紫外分光光度法，適用于五味子藥材中五味子酯甲的含量測(cè)定及藥品的質(zhì)量監(jiān)控。
3.3 本研究表明，南、北五味子中均含有五味子酯甲成分，并且五味子酯甲含量南五味子略高于北五味子，而其他相關(guān)報(bào)道[5]五味子有效成分中的木脂素類多為北五味子高于南五味子，這可能與五味子的產(chǎn)地、采收季節(jié)等諸多因素有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為南五味子藥效的重新認(rèn)識(shí)以及擴(kuò)大其應(yīng)用范圍提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，同時(shí)也為南五味子的開發(fā)、利用提供了實(shí)驗(yàn)參考，可在一定程度上緩解經(jīng)濟(jì)發(fā)展和生態(tài)環(huán)境變遷導(dǎo)致的北五味子的蘊(yùn)藏量大幅度下降和需求量不斷增長(zhǎng)的矛盾。
【參考文獻(xiàn)】
1 沈振鐸，陳曉輝，熊麗，等.評(píng)價(jià)五味子和南五味子質(zhì)量的GC指紋圖譜的建立與分析[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，8(25)：650654.
2 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].2005年版一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.
3 明延波，趙華，周麗，等.五味子的研究進(jìn)展[J].實(shí)用藥物與臨床，2007,6(10)：365367.
4 趙艷玲，孔維軍，山麗梅，等.HPLC法測(cè)定南北五味子中五味子甲素和五味子酯甲的含量[J].中藥新藥與臨床藥理，2008,4(19)：299301.
5 張林疆，劉唯芬，畢開順，等.五味子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].遼寧中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004,3(6)：219220.
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